Уважаемые коллеги! НСС собрал наиболее актуальные вопросы по АЧС. Ответы подготовлены сотрудниками ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии» и рецензированы его директором – доктором ветеринарных наук, профессором Колбасовым Денисом Владимировичем.
В случае инфицирования животного вирус постоянно циркулирует только в клетках крови, или и в других клетках (если циркулирует, то в каких клетках)?
Тест-полоски для выявления антител к вирусу АЧС. Примечание: А – положительный результат; Б – отрицательный результат.
После проникновения в организм и репликации в лимфоидных органах вирус АЧС распространяется с кровью во все органы и ткани свиней. Поэтому присутствие вируса можно обнаружить (прямо или косвенно) практически во всех органах и тканях.
При заболевании, вызванном гемадсорбирующими изолятами, вирус в крови связывается с эритроцитами, которые содержат более 90% циркулирующего вируса, хотя он также связан с лимфоцитами и нейтрофилами. Вирус АЧС размножается главным образом в моноцитах и макрофагах мононуклеарной фагоцитарной системы, которые являются основными мишенями для репликации вируса в организме свиней. Моноциты циркулируют в периферической крови, макрофаги находятся в различных органах и тканях организма. Известно также, что вирус обнаруживался в клетках почек, печени, мышечных клетках сосудов, красного костного мозга. Вирусный геном и вирус были обнаружены в половых органах и придаточных половых железах, что могло указывать на выделение вируса со спермой. Однако иммуногистохимическими исследованиями вирусный антиген был выявлен преимущественно в макрофагах, а не в эндотелиальных или стромальных клетках, что вероятно указывает на попадание вируса в органы с циркулирующей кровью.
Как, и в каком количестве проводить отбор проб для самого раннего выявления вируса АЧС в стаде? Каким методом исследовать?
Прежде всего нужно отметить, что особенно при большом поголовье по клиническим признакам или уровню отхода животных выявить в хозяйстве АЧС на ранних этапах (максимально близкой к моменту заноса вируса в хозяйство) крайне сложно. Это связано с низкой (некоторые определяют ее как среднюю) контагиозностью вируса. В течение длительного времени (недели и месяцы) болезнь может оставаться незамеченной, поскольку показатели падежа остаются в технологических пределах по всему хозяйству. Только постоянный лабораторный мониторинг (пассивный и активный) позволил бы обеспечить раннее выявление инфекции.
В условиях, когда возникновение АЧС можно ожидать в любом хозяйстве любого региона, в целях своевременного выявления АЧС тестированию должны быть подвергнуты все без исключения животные, имеющие какие-либо признаки заболевания вообще и все без исключения павшие животные.
Помимо планового мониторинга на подтверждение благополучия региона, предусмотренного Ветеринарными правилами по АЧС, необходимо проводить пассивный и активный мониторинги на уровне хозяйства. Пассивный должен предусматривать отбор проб и проверку на АЧС от всех павших животных, а также от всех животных, имеющих какие-либо отклонения от нормы. В плане активного мониторинга очень важно проводить карантинирование и исследования на АЧС случайно отобранных проб от вновь поступающих животных. При этом важно, чтобы размер выборки позволял с достаточно высокой вероятностью вывить потенциально зараженное животное. Для этого можно ориентироваться на цифры, определенные действующими ветеринарными правилами по АЧС:
- от 1 до 15 голов – пробы отбираются от каждого животного;
- от 16 до 50 голов – пробы отбираются от 15 свиней;
- от 51 до 100 голов – пробы отбираются от 22 свиней;
- от 101 до 500 голов – пробы отбираются от 25 свиней;
- для групп свиней, насчитывающих 501 свинью и более, пробы отбираются от 30 свиней.
Пробы следует отбирать с участием представителя госветслужбы и направлять в лабораторию (испытательный центр) системы госветслужбы, или иную лабораторию (испытательный центр), аккредитованную в национальной системе аккредитации для исследования на АЧС.
Лабораторные исследования проб должны проводиться с использованием одного из методов:
- молекулярно-биологических исследований методом полимеразной цепной реакции (далее – ПЦР);
- вирусологических исследований (изоляция вируса на чувствительной культуре клеток и его идентификация в реакциях: гемадсорбции, ПЦР, реакции прямой иммунофлуоресценции (далее – РПИФ);
- методом обнаружения антигена возбудителя в РПИФ;
- методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Для выявления возбудителя в продуктах убоя свиней и продуктах их переработки используется метод ПЦР.
Для выявления антител к вирусу АЧС используют серологические методы (ИФА, иммуноблоттинг).
От живых животных отбирают кровь.
Для обнаружения вируса АЧС с помощью ПЦР и выделения вируса рекомендованным минимальным количеством является:
- сыворотка: 1 мл
- кровь с ЭДТА (Трилон Б): 1 мл
Важно помнить, что применение гепарина не допустимо, т. к. это может вызвать ингибирование ПЦР.
Для обнаружения антител с помощью ИФА и подтверждающими методами рекомендованным минимальным количеством является сыворотка: 500 мкл (0,5 мл).
От павших животных отбирают органы (без консервации формалином). Рекомендованное минимальное количество – 5 г. Предпочтительными органами являются селезенка и лимфатические узлы (подчелюстные, бронхиальные, портальные, мезентериальные), так как они обычно содержат наибольшее количество вируса. Лимфатические узлы берут целиком, от внутренних органов отбирают кусочки весом 5-10 г, не позднее, чем через 10 ч после убоя или гибели животного.
Для раннего выявления животных с атипичным поведением и повышенной температурой (подозрительных животных) можно применять видеонаблюдение и тепловизоры.
