Материалы
Главная  »  Материалы  »  Круглый стол "Отбор проб для лабораторных исследований"
Май
28
Дарья Колякина
Круглый стол “Отбор проб для лабораторных исследований”
Материалы конференции 2018 г.
0
, , ,

В рамках конференции “Ветеринария в свиноводстве – 2018” прошёл круглый стол о правилах отбора проб для лабораторных исследований. Тема круглого стола подсказана практикой: от правильности отбора проб зависит достоверность анализа. В разговоре приняли участие представители лабораторий, компаний – производителей тест-систем, научных институтов.

Участники:

  • Виткова Ольга Николаевна, ФГБУ «Центр ветеринарии», г. Москва
  • Возняк Михаил Владимирович, ИЛ «Тест-Пущино», г. Пущино
  • Колбасенко Алексей, IDEXX, Германия
  • Афонюшкин Василий Николаевич, ИЭВСиДВ СФНЦА РАН, г. Новосибирск
  • Раев Сергей Алексеевич, ООО «Ветбиохим», г. Москва
  • Бирюченков Дмитрий Анатольевич, ФГБУ ВНИИЗЖ, г. Москва

Ведущий:

 Духовский Александр Александрович, секретарь экспертно-консультационного совета при Национальном совете свиноводов, г. Москва.

Открывая круглый стол, ведущий А.А. Духовский отметил, что частично эта тема была обсуждена в ходе круглого стола при РРСС.

М.В. Возняк выступил с докладом об инструментах, которыми располагают лаборатории для обнаружения и идентификации бактериальных инфекций и патогенных микроорганизмов свиней. Он назвал микробиологический метод как наиболее универсальный, позволяющий выделить большинство микроорганизмов, получить культуру, проверить ее на чувствительность к антибиотикам. К недостаткам этого метода докладчик отнес длительные сроки и трудность выделения определенных микроорганизмов, например, микоплазмы. Поэтому все большую популярность набирает метод молекулярно-генетического анализа ПЦР. Кроме того, есть многочисленные экспресс-методы, доступные для применения не только в лабораториях, но и в хозяйствах.

Когда лаборатория получает микроорганизм, выделенный из пробы, требуется подтверждение его идентификации. Для этого существуют такие методы, как классическая морфология (микроскопия с окраской), серология и другие. Основным методом идентификации считается биохимия, поскольку у каждого микроорганизма есть профиль ферментов, по которому можно определить принадлежность к таксону. Используются также новые методы, такие, как масс-спектрометрия и риботипирование (определение микроорганизмов по рибосомальной ДНК).

Максим Владимирович обратил внимание на основные правила, которыми следует руководствоваться при отборе проб. Основное правило – брать пробу из очага поражения. Кроме того, в лабораторию следует отправлять сыворотку, а не цельную кровь. Если в дороге проба замерзнет, то лаборатория не сможет отделить сыворотку, проба становится непригодной для испытаний. Однако пробы сыворотки следует направлять именно в замороженном виде, иначе они портятся. Докладчик призвал ветеринаров пользоваться транспортными средами, как классическими, так и жидкими. Например, для жидкой среды используется синтетический тампон из специального материала с большой площадью контакта, который позволяет захватить большое количество эпителия. В отличие от испытаний методом ПЦР, пробы органов для микробиологического анализа лучше не отправлять замороженными, т.к. не все микроорганизмы хорошо переносят заморозку. Также если отправляются анаэробные микробы на анализ, не следует отправлять кишку, завязанную с двух сторон. В этих случаях лучше использовать транспортную среду. М.В. Возняк подчеркнул, что отбор проб – огромная проблема, лаборатории часто получают непригодные пробы.

С помощью наглядных слайдов Максим Владимирович продемонстрировал селективные среды, которые позволяют отделить целевой микроорганизм от других, так как в реальной пробе из реального органа никогда не будет одной чистой культуры. Он показал возможности хромогенных сред, в которые добавлены субстраты для ферментов, позволяющие окрашивать колонию. Их использование позволяет разделять культуры и получать достоверную информацию на одной пробе.

Докладчик остановился на ПЦР как методе, применимом не только для вирусных, но и для бактериальных инфекций. Для этого метода имеются многочисленные тест-системы как универсального, так и специального назначения. Имеются также тест-системы санитарного назначения, позволяющие проверить готовую продукцию на микробиологические загрязнение.

Также Максим Владимирович прокомментировал использование метода ИФА как незаменимого для культивирования и выделения микоплазмы. Он обратил внимание на то, что это длительный и сложный метод. Однако имеется тест-система, позволяющая быстро получить информацию о наличии антител в крови, в том числе антител к токсинам.

Докладчик остановился на особенностях применения различных лабораторных методик. Например, для иммунохроматографии требуется брать образец после обогащения, но тем не менее этот метод позволяет сократить сроки исследования. Цветной латексный тест позволяет за 5 минут определить серогруппу по цветовой реакции агглютинации. Масс-спектрометр позволяет получить однозначную информацию о таксоне (вид, штамм, род), причем на один образец тратится около 18 секунд и не обязательно брать чистую культуру. Основным инструментом подтверждения патогенности является биопроба, а методы молекулярно-генетического анализа позволяют более гуманно относиться к лабораторным животным.

В заключение М.В. Возняк сообщил о приборе из другой лаборатории, позволяющем идентифицировать микроорганизмы по рибосомальной ДНК. Доклад сопровождался обильным и наглядным иллюстративным материалом.

После доклада состоялась дискуссия об особенностях дифференциации конкретных микроорганизмов и о целесообразности длительных исследований, в которой приняли участие Д.А. Бирюченков, А. Колбасенко, В.Н. Афонюшкин, О.Н. Виткова, С.А. Раев, М.В. Возняк. Было отмечено, что лабораторная диагностика – не единственная часть процедуры дифференциации. Важны отбор проб, самоанализ специалиста в хозяйстве и интерпретация. В частности, прозвучало замечание А. Колбасенко, что после вакцинации в организме животного не всегда образуются антитела к возбудителю, во всяком случае, не в таком же количестве, как у переболевших животных, и это имеет значение для дальнейшей работы. М.В. Возняк высказал сожаление, что нет универсального легкого инструмента для диагностики бактериальных инфекций. Если говорить об идеальном подходе к диагностике, то нужно использовать комбинацию из нескольких методов, но постоянно задавать себе вопрос об экономической целесообразности. Было отмечено, что важна просветительская работа, хотя бы на уровне постоянных клиентов, чтобы адаптировать подход к решению проблемы. А. Колбасенко заметил, что на диагностике никогда нельзя экономить, нужно досконально понять ситуацию, чтобы избежать проблем в будущем. Что касается диагностики АПП, то компания IDEXX имеет диагностический набор, позволяющий определить все 15 серотипов АПП и разделить их на 3 группы по вирулентности, причем есть дифференциация вакцинированных и инфицированных животных. Тем не менее, нет смысла серотипизировать АПП, во-первых, потому что имеются вакцины, защищающие от всех 15 серотипов, во-вторых, потому, что даже возбудители слабовирулентной группы при определенных условиях могут вызвать заболевание.

А.А. Духовский поднял вопрос о целесообразности введения в стадо завезенных животных, находящихся на карантине, но имеющих высокий титр по АПП. Мнение Алексея Колбасенко категоричное: АПП-положительные животные не должны вводиться в основное стадо, хотя при благоприятных условиях содержания и кормления не будет наблюдаться клинических проявлений и не будет вспышки заболевания.

В.Н. Афонюшкин усомнился в необходимости тщательной идентификации. При современном многообразии методов и инструментов есть вероятность, что при выделении инфекционного агента нет гарантии, что будет определен тот самый инфекционный агент, клинически и эпизоотически значимый. Не факт, что антибиотик будет эффективен, поскольку есть ряд других механизмов, которые могут этому помешать. Не рациональнее ли, высказал предположение Василий Николаевич, при вспышке определенного заболевания сформировать группы животных и пробовать лечить их разными антибиотиками и инактивированными вакцинами? М.В. Возняк ответил, что с одной стороны, это правильно, и большинство ветеринаров так и делают, направляя пробу в лабораторию в последнюю очередь. Но бывают ситуации, когда на бактериологический анализ направляется проба после недельного лечения антибиотиками. При бесконтрольном применении антибиотиков есть риск сформировать в хозяйстве резистентную культуру. Поэтому важен правильный отбор проб из очага поражения, и если речь идет о вскрытии, стараться взять пробу оттуда, куда проникают только патогены, например, из костного мозга. Что касается диагностических процедур, то точка зрения Максима Владимировича такова, что есть необходимые процедуры, без которых не обойтись в определенных случаях. Например, невозможно дифференцировать стафилококк или стрептококк без биохимии, а определение сальмонеллы требует серологии. Для быстрого решения вопросов Максим Владимирович предложил использовать, в частности, иммунохроматографию. В завершение дискуссии В.Н. Афонюшкин отметил, что, поскольку речь идет о крупных свинокомплексах, мы можем позволить себе статистику и, во всяком случае, следует проводить ассоциативный анализ.

А.А. Духовский обратил внимание на системный подход к диагностике. При наличии определенного синдрома целый ряд специалистов, в числе которых ветеринары, эпизоотологии и другие, участвуют в определении необходимых противоэпизоотических мероприятий. И поскольку ситуация оставляет желать лучшего, следует всем звеньям этой цепочки повысить тщательность решения своей части вопросов.

О.Н Виткова продолжила тему отбора проб, поскольку это краеугольный камень всей лабораторной диагностики. Если на стартовом этапе будут допущены ошибки или будут проблемы с транспортировкой и доставкой, то диагностическая ценность таких образцов будет минимальной. Она обратила внимание на то, что свиноводство – это та отрасль, где используются сложные схемы иммунопрофилактики, и бывает сложно разобраться, в чем проблема. На ситуацию может повлиять и качество корма, наличие в нем интоксикантов. Нужно иметь четкий алгоритм всех действий, чтобы в лабораторию пришел целевой материал. В современных условиях у лабораторий нет возможности отправлять сотрудников на место возникновения инфекции, в конкретное хозяйство. Лаборатория работает таким образом: исследование проводится по тому направлению, которое задает заказчик. Кроме того, Ольга Николаевна обратила внимание, что доставка проб – это область уголовной ответственности. Нужно не привнести в образец ничего постороннего, но нужно и образцом не контаминировать окружающую среду. Если в дороге возникла непредвиденная ситуация, нужно поднять все необходимые службы. Кроме того, нужно быть очень осторожными при вскрытии и тщательно его проводить, готовиться к нему и использовать средства индивидуальной защиты. Каждый раз специалисты должны быть готовы к любой ситуации. Но самое главное, чем раньше необходимый образец будет отобран и доставлен в лабораторию, тем выше будет его диагностическая ценность. Что касается заморозки, сыворотка крови довольно долго может храниться на сгустке. Но если образец был заморожен, нужно это указать в сопроводительной документации, поскольку если он будет заморожен и разморожен повторно в лаборатории, то могут быть потеряны все титры. Нужно строго выполнять инструкции по применению конкретного метода.

М.В. Возняк выразил поддержку всем положениям, озвученным О.В. Витковой, и добавил, что чем полнее будет сопроводительная документация, тем больше вероятности получить информативный результат.

В завершение О.В. Виткова проинформировала, что в рамках ЕвразЭС готовится документ по методологии отбора ветеринарных проб, и в нем будут приведены образцы сопроводительной документации.



Оставьте ответ

Войдите , чтобы оставлять комментарии.

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.